凝血实验操作应注意的哪些问题?
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(1)孵育时间与温度是在一期法凝血酶原时间测定时应严格控制的参数。血浆绝不能在37℃下放置超过10分钟,凝血活酶放置时间也不能超过说明书所规定的时限。
(2)血液凝固主要是酶催化的反应,因此实验过程中要严格控制理想的PH环境和溶液的离子强度。多数常规试验都在处于血液生理PH值缓冲范围的缓冲系统中进行。反应混合物的PH值必须处于7.2-7.4之间。
(3)试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。如每次APTT实验时,活化部分凝血活酶试剂和血浆混合物的孵育时间必须一致。混匀过程决定了APTT试验中接触活化的量,在孵育时如果将活化部分凝血活酶与血浆混合的技术不佳,将会改变测定结果。
(4)实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。红细胞膜含有磷脂,溶血标本具有与血小板第Ⅲ因子(磷脂)相似的凝血活性,这种磷脂能缩短溶血血浆的APTT值。标本中如果出现凝块,无论该凝块多么小,均会影响实验结果。
(5)血液与抗凝剂的比例必须相当精确。抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度,进而影响实验结果,一定要注意采血时血浆与抗凝剂的比例。
HCT对枸橼酸钠抗凝血浆APTT,PT的影响
HCT(%) PT(s) APTT(s)
10 10.0±0.58 23.3±3.2
20 10.4±0.17 28.2±1.4
40 11.1±0.66 33.3±4.3
60 13.5±1.46 37.2±4.0
70 14.9±0.98 38.5±3.1
80 52.5±7.74 60.5±10.3
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