艾滋病歷代檢測試紙介紹
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第一代試劑
1985年3月,美國食品藥品監督管理局批准了第一個HIV抗體篩查試劑並將其應用於獻血員的篩查,該試劑即爲第一代HIV診斷試劑。第一代HIV診斷試劑原理爲間接ELISA法,所用的包被抗原爲體外培養的HIV裂解物,這種病毒裂解物中不僅含有很多雜抗原,而且所含的主要HIV結構和表達蛋白濃度不能保證,並且天然的結構和表達蛋白上含有很多交叉抗原表位,因而,靈敏度和特異性不高,出現許多假陰性和假陽性。儘管如此,第一代HIV診斷試劑的出現仍然是一個劃時代的改變,其有效阻斷了HIV通過血液的傳播。
第二代試劑
隨着基因工程技術迅速發展,1990年5月第二代使用基因重組或合成多肽抗原的HIV診斷試劑面試。雖然仍然是利用間接酶聯免疫法原理,但第二代診斷試劑窗口期比第一代診斷試劑縮短了約20天,靈敏度和特異性也有所提高。同時由於第一代試劑只含有HIV-1抗原,而HIV-1抗原與HIV-2抗原的核苷酸序列相差40%,因此檢測HIV-1抗體的試劑對HIV-2抗體陽性的標本靈敏度較低,常發生漏檢,針對此種情況第二代診斷試劑中出現了HIV-1/HIV-2抗體診斷試劑盒,這種試劑盒在包被的抗原中又加入了HIV-2抗原(gp36多肽),使得在一次試驗中可同時檢測HIV-1和HIV-2抗體,既節約了時間和人力,又節約了成本。第二代試劑與第一代相比,特異性有明顯的提高。
第三代試劑
1994年出現的第三代HIV診斷試劑一改過去間接法檢測原理,利用雙抗原夾心法檢測標本中的抗體,酶標記物也由抗人lgG抗體(即第二抗體)改爲特異性HIV抗原。此外,在非洲喀麥隆發現了HIV-1 O羣后,研究者以HIV-1/HIV-2抗體試劑檢測HIV-1 O羣標本時發現常出現假陰性,因此又在試劑中加入HIV-1 O羣抗原(gp41多肽)。因此第三代試劑靈敏度提高,窗口期進一步縮小,是國際上公認的較好檢測抗體模式,也是目前國際和國內市場上的主流產品,常被視爲金標準。目前我國國產第三代HIV診斷試劑盒在靈敏度、特異性方面已達到國際先進水平。
第四代試劑
第四代HIV診斷試劑是一種HIV-1/HIV-2抗體與HIV-1 O亞羣抗體及p24抗原的聯合檢測方法。這種試劑省去p24抗體檢測而增加了p24抗原檢測,並不影響HIV抗體的檢測。在對第四代試劑的研究中發現p24抗原滴度降低與血清陽轉過程中未降低S/CO值,也沒有發現第四代試劑檢測陰性而第三代試劑檢測爲陽性的樣本,所以未在p24抗原血癥和血清抗體陽性轉之間引入診斷的第2個窗口期。第四代由於可同時檢測抗原和抗體,未完善的HIV感染的篩查試劑,因而,獻血員篩查時,建議用第四代試劑進行檢測,以儘量提高輸血的安全性。
金標層析法(快速法)
試紙條是採用免疫層析技術研製的新一代檢測試劑,可檢測血清或血漿標本中的HIV-1/2特異性抗體。整個操作時間僅需15分鐘,操作簡便、快速、準確、自帶質控對照、不需任何附加試劑。適用於臨牀檢驗、無償獻血現場篩查等。其原理是:在硝酸纖維素膜上的檢測區包被基因重組的 HIV--1+2 抗原,在對照區包被抗 HIV 抗原單克隆抗體。檢測時樣品中的抗 HIV 抗體與標記膠體金的基因重組 HIV--1+2 抗原形成Ag-Au複合物,由於層析作用,複合物沿膜帶移動,可與包被的基因重組 HIV--1+2 抗原形成雙抗原夾心免疫複合物。如爲陽性樣品,則可分別在檢測區和對照區各凝集形成一條紅色線,如爲陰性樣品,則只在對照區形成一條紅色線。
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